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快速高效的RT-PCR预混液,50℃反应,含DNase和RNase抑制剂,基因组去除和逆转录反应可一步进行
产品特点
简便快捷:基因组去除与逆转录可一步/两步完成。仅需加入RNA模板和水即可进行逆转录反应;
热稳定性强:50℃反应,提高了RNA模板复杂二级结构的逆转录效率;
逆转录效率高:与市面上同类产品对比,本产品的逆转录效率更高。
产品简介
本产品是一款高效、便捷的第一链cDNA合成试剂,UnionScript First-strand cDNA Synthesis Mix中包含UnionScript Reverse Transcriptase及其反应Buffer、Rnasin、dNTPs、Oligo(dT)20VN和随机引物等第一链cDNA合成所需的所有组分,仅需加入RNA模板和水即可进行逆转录反应。
本产品中包含的UnionScript Reverse Transcriptase是新一代逆转录酶,50℃反应,热稳定性强、逆转录效率高。dsDNase可有效去除RNA模板中残留的基因组DNA,保证后续定量结果更加可靠, qPCR引物无需跨内含子设计。使用本产品逆转录得到的cDNA可用于下游qPCR检测。
产品组成
组分 | 规格(100次) |
UnionScript First-strand cDNA Synthesis Mix | 400 μL |
dsDNase | 2×50 μL |
10×dsDNase Buffer | 200 μL |
Nuclease-Free Water | 2×1.0 mL |
实验案例
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Q1:逆转录后的cDNA产物进行qPCR检测,CT值偏高?
A1:
1)模板 RNA 提取失败或存在降解。建议在逆转录反应前一定要电泳验证 RNA 的完整性,提取RNA 后尽快进行逆转录及 qPCR 操作;
2)基因表达量较低。可适当提高模板RNA用量;
3)逆转录体系、程序或加样等操作不当。建议按照说明书规范操作。
Q2:逆转录后进行 qPCR,熔解曲线非单一峰?
A2:
1)RNA 模板中含有 gDNA。建议逆转录前进行去基因组反应或引物跨内含子设计;
2)qPCR 引物特异性差。重新设计特异性较好的引物,可通过常规 PCR检测引物特异性;
3)引物过量。引物过量可能形成引物二聚体,建议按说明书推荐用量添加;
4)体系可能存在污染。设置无模板阴性对照(NTC)检查体系是否存在污染,若存在污染,建议更换试剂及耗材,使用核酸清洁剂清洁(目录号:ND709)操作台面及实验环境中的气溶胶污染。
说明书:点击下载
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