Q1：过滤柱出现堵塞？

A1：

1) 样品用量过多。按照说明书推荐的要求适量取样；

2) 若裂解液较粘稠，不好吸取，可在步骤2前先将样品于12,000 rpm(~13,400×g) 离心2min，取上清再进行步骤2过滤；

3) 样品富含多糖多酚类物质。处理富含多糖多酚的组织，推荐使用专用试剂盒提取；

4) 离心温度过低。本产品使用操作均在室温下进行。

Q2：提取的RNA出现降解？

A2：

1) 样品用量过多。影响裂解液的裂解能力，造成RNase未被充分抑制，导致RNA降解，建议参考说明书推荐取样量，若要增加样品起始量，则后续实验中各溶液量均要按等比例增加。对于内源RNase含量较多的组织应减少样品量，适当增加裂解液用量；

2) 样品保存不当。反复解冻会引起RNA降解，尽量使用新鲜样品或者解冻次数不超过2次的样品；

3) 操作过程中引入RNase污染。请使用RNase-Free的工具、试剂和耗材；

4) 电泳过程中发生降解。使用RNase-Free的Loading Buffer、琼脂糖和电泳缓冲液等。

Q3：RNA得率低？

A3：

1) 样品用量过多。样品过量会影响裂解效果，建议按照说明书要求适量取样；

2) 样品裂解不充分。请按照说明书的要求进行充分研磨、裂解；

3) 洗脱不充分。RNase-Free ddH₂O需直接加到膜中央，并静置2 min后再离心，必要时可进行二次洗脱以提高产量；

4) 吸附柱有乙醇残留。使用Buffer GRW2漂洗后需要开盖晾干吸附柱中的乙醇。

Q4：提取的RNA中有DNA污染？

A4：

1) 样品用量过多。超出试剂盒规定的样本量影响裂解液的裂解能力可能会导致基因组的污染；

2) 次生代谢物较多。次生代谢物含量高的样本在提取RNA时易出现基因组的污染；

3) 操作过程中需要进行去除基因组DNA的操作，若DNA含量较多，可延长DNase I消化时间或重复消化。 

说明书：点击下载

[1] Fan N, Xu Q, Yang Z, et al. Identification of expansin genes as promoting or repressing factors for leaf elongation in tall fescue. Physiologia Plantarum. 2023,175(1):e13861.

[2] Lin Y, Qi X, Wan Y, et al. Genome-wide analysis of the MADS-box gene family in Lonicera japonica and a proposed floral organ identity model. BMC Genomics. 2023,24(1):447.

[3] Li S, Liu J, Xue C, et al. Identification and Functional Characterization of WRKY, PHD and MYB Three Salt Stress Responsive Gene Families in Mungbean (Vigna radiata L.). Genes (Basel). 2023,14(2):463.

[4] Zhao Y, Xie Q, Yang Q, et al. Genome-wide identification and evolutionary analysis of the NRAMP gene family in the AC genomes of Brassica species. BMC Plant Biology. 2024,24(1):311.

[5] Wang H, Zhang Y, Zhang L, et al. Genome-Wide Identification and Characterization of the TIFY Gene Family and Their Expression Patterns in Response to MeJA and Aluminum Stress in Centipedegrass (Eremochloa ophiuroides). Plants (Basel). 2024,13(3):462.