Q1：条带信号弱或无条带？

A1：

1) 样品中目的蛋白含量低。适当增加上样量；

2) 目的蛋白未完全转移到膜上。优化转膜条件、建议更换缓冲液、确保膜使用前做预处理，确定转膜时胶和膜之间无气泡；

3) 抗体使用浓度低或孵育时间不够。增加抗体使用浓度或孵育时间；

4) 曝光时间太短。适当延长曝光时间；

5) 局部底物消耗过快。降低上样量、优化抗体使用浓度、增加ECL底物用量。

Q2：背景过高？

A2：

1) 封闭不充分。优化封闭剂种类、浓度及封闭时间；

2) 洗膜不充分。增加洗膜时间和次数；

3) 抗体浓度过高。建议按照抗体供应商的推荐稀释比例进行优化，可做梯度稀释摸索抗体最佳使用浓度；

4) 曝光过度。减少曝光时间。

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