Q1：逆转录后的cDNA产物进行qPCR检测，CT值偏高？

A1：

1）模板 RNA 提取失败或存在降解。建议在逆转录反应前一定要电泳验证 RNA 的完整性，提取RNA 后尽快进行逆转录及 qPCR 操作；

2）基因表达量较低。可适当提高模板RNA用量；

3）逆转录体系、程序或加样等操作不当。建议按照说明书规范操作。

Q2：逆转录后进行 qPCR，熔解曲线非单一峰？

A2：

1）RNA 模板中含有 gDNA。建议逆转录前进行去基因组反应或引物跨内含子设计；

2）qPCR 引物特异性差。重新设计特异性较好的引物，可通过常规 PCR检测引物特异性；

3）引物过量。引物过量可能形成引物二聚体，建议按说明书推荐用量添加；

4）体系可能存在污染。设置无模板阴性对照（NTC）检查体系是否存在污染，若存在污染，建议更换试剂及耗材，使用核酸清洁剂清洁（目录号：ND709）操作台面及实验环境中的气溶胶污染。

说明书：点击下载